PRM定量蛋白質組學

PRM(平行反應監視,parallel reaction monitoring)是一種基于高分辨、高精度質譜的離子監視技術,是對傳統質譜定量技術SRM/MRM的升級版,該技術能夠對目標蛋白質、目標肽段(如發生翻譯后修飾的肽段)進行選擇性檢測,從而實現對目標蛋白質/肽段進行絕對定量。


PRM定量蛋白質組學?


PRM技術基于高分辨、高精度質譜(如Orbitrap系列),首先利用四級桿質量分析器的選擇檢測能力,在一級質譜中(Q1)選擇性地檢測目標肽段的母離子信息;隨后在collision cell中對母離子進行碎裂;最后利用高分辨、高質量精度分析器在二級質譜中檢測所選擇的母離子窗口內的所有碎片的信息。這樣即可對復雜樣本中的目標蛋白質/肽段進行準確地特異性分析。?

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技術特點:???????

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相比于傳統的SRM/MRM技術,PRM技術將采集二級信息所用的四級桿質量分析器替換為更高分辨、更高質量精度的分析器,實現了從目標離子對檢測到全部目標離子碎片檢測的轉化。因此,PRM技術不僅具有SRM/MRM的靶向定量分析能力,還同時具備了定性能力。

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其在定量分析中的優勢還體現在:

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(1)質量精度達到ppm級,能夠比SRM/MRM更好地排除背景干擾和假陽性,有效提高復雜背景下的檢測限和靈敏度;

(2)對子離子進行全掃描,無需選擇離子對和優化碎裂能量,更容易進行方法學建立;

(3)更寬的線性范圍:增加至5-6個數量級。???

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PRM應用范圍:???????

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1、可以對iTRAQ/TMT標記定量差異蛋白進行驗證;

2、可以對LFQ非標定量差異蛋白進行驗證;

3、可以對肽段和蛋白質進行絕對定量分析;

4、可以對已經建立或尋找到的Biomarker蛋白進行定量分析;

5、可以特異性地對蛋白的修飾位點(磷酸化、乙?;龋┻M行定量分析;

6、可以特異性地某通路蛋白進行定量分析??


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